大體積外泌體樣本量分離方法總結大體積外泌體樣本在濃縮后根據不同應用，需銜接不同的外泌體分離方法。維思克思總結出現在常用、簡便、效果比較好的三種方法。SEC重力柱是基于分子排阻色譜原理，根據被分離組分分子大小差異進行外泌體的分離。具有操作簡便、高純度和高回收率等優點，特別適用于大體積樣本中的外泌體分離。分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究、細胞和動物功能研究等。（WSR0003）SEC離心柱是離心柱式的外泌體分離產品，離心柱中裝填的介質能無差別的吸附雜質而不結合外泌體，實現超快速、高收率的外泌體分離。分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究、細胞和動物功能研究等。（WSP0016）磁珠法外泌體分離試劑盒基于自主研發的均相液體磁珠，能特異性捕獲外泌體，實現高純度、高回收率外泌體分離。具有操作簡便、高純度和高回收率等優點，特別適用于血漿、血清等復雜樣本中的外泌體分離。分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究、細胞和動物功能研究等。（WSR0002-2）外泌體研究工具定制化組合方案，按需搭配組件，避免功能冗余浪費。金線蓮sEVs源頭工廠

外泌體研究常見問題解答72.哪些標記物可用于外泌體表征？檢測膜結合或膜相關蛋白，以驗證膜的存在。許多外泌體中發現了CD63、CD81和CD9等。然而檢測到至少2種不同細胞系釋放CD9陰性的外泌體（Jurkat和幾種B細胞淋巴瘤細胞）。通常檢測CD9、CD81和CD63以驗證我們的制劑中是否存在膜。同樣重要的是需要確定來自細胞器的污染囊泡水平：ER：熱休克蛋白90B1，鈣內；高爾基：GM130；線粒體：細胞色素C；細胞核：組蛋白。外泌體分子組成因細胞來源而異。雖然這些單個分子類別的測量可用于估計外泌體豐度，但這些值不一定與外泌體濃度完全相關，也不存在跨EV源樣本的普遍性；因此，不應將其作為的外泌體濃度測量方法。不同原理外泌體表征方法的測量值不太可能有相同偏差；例如，光學與非光學方法測量的外泌體直徑。由于許多外泌體表征方法不是特異性的，就是無法檢測所有的外泌體。植物和中草藥囊泡目前公認的特異性蛋白標志物，據多篇文獻報道TET-8很可能是植物囊泡的潛在蛋白標志物。細菌的特異性蛋白標志物，脂多糖（革蘭氏陰性菌）、脂胞壁酸質（革蘭氏陽性菌）和分枝桿菌脂質。靈芝Exosome廠家批發外泌體研究工具簡易操作設計，無需復雜設備，降低實驗室入門成本。

外泌體標記真的只能用PKH和DiR嗎？外泌體作為近幾年的“科研新貴”，可謂是紅極一時。由于它們具有獨特的遷移、靶向和選擇性內化進入特定細胞的能力，是非常有前途的遞送載體。然而，目前在外泌體的示蹤研究和應用上還存在一些難點：難點一：目前對于胞外囊泡的標記方法有很多種，包括親脂性的染料(如：PKH、Dil等)，這些染料與外泌體膜不是共價結合，而是通過疏水相互作用短暫結合在一起的。在后續的細胞攝取時，會出現示蹤染料在不同膜結構或脂溶性物質間發生不斷解離和結合的現象，從而影響結果的準確性。ps：分離的外泌體中也會存在一些脂質，也會與示蹤試劑結合。難點二：目前外泌體等胞外囊泡有一部分的歸宿是在溶酶體，而溶酶體的酸性環境，絕大多數外泌體示蹤染料發出的熒光都會淬滅，那么這一部分外泌體的去向就難以檢測到。該外泌體示蹤試劑盒來自維思克思生物科技，是該公司兩項發明**轉化而來，對比其他染色方法，該探針具有低背景、高效率、強耐酸的優勢！產品信息：ExosomeWisTracker-IIKit（WSR0001-2）。

升級版-外泌體脂質定量試劑盒脂質是外泌體的主要組成部分，可以測量外泌體中脂質含量來對外泌體進行定量和質量表征！從原理上來說，既然蛋白濃度可以一直作為外泌體定量和表征的重要指標。那么用脂質來對外泌體進行定量和表征也是非常可行的。升級版外泌體脂質定量試劑盒突出優勢：試劑盒包含獨特的脂質結合熒光探針，該探針分子的熒光背景低，在與脂質結合時發出明亮的熒光，從而測量樣品的脂質含量。特異性檢測外泌體脂質，該探針只與外泌體脂質結合才能發光，與其他雜質（核酸、蛋白、糖、鹽等）不結合，可以特異性檢測外泌體脂質。線性范圍廣，靈敏度高，線性范圍：0-1000μg/mL，檢測靈敏度可達50μg/mL。重復性好，CV值低，可以保證脂質測量的準確性。適用于多種脂質類型，外泌體的脂質主要是磷脂，本試劑盒可以檢測到磷脂，用于外泌體定量和表征。同時也可以檢測其他多種脂質。應用范圍：外泌體/LNP脂質定量、外泌體表征產品信息：ExosomalLipidQuantificationKit(Fluorometric)（WSR0028-2）外泌體研究工具批量訂單快速交付，減少等待時間，保障研究進度。

外泌體研究常見問題解答61.如何鑒定提取出來的外泌體？根據MISEV2023，鑒定外泌體首先需要通過WB來鑒定細胞外囊泡的標志蛋白是否存在于樣品中，通過電子顯微鏡來觀察樣品中細胞外囊泡的形態特征，通過NTA等手段來分析樣品中細胞外囊泡的群體特征（粒子濃度、直徑分布等）。一般從外泌體形態、外泌體粒徑和外泌體標志物來鑒定。（1）鑒定外泌體形態：通常使用透射電鏡檢測（TEM）；（2）鑒定外泌體粒徑（大小）和濃度：可以使用納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、納米庫爾特粒度儀檢測；（3）鑒定動物細胞外泌體標志物：通常使用WB檢測外泌體標志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101、Alix等），按國際細胞外囊泡協會的建議為檢測3個陽性（一般選擇2個表面標志，1個內部標志）和1個陰性指標（Calnexin或GM130）。外泌體研究工具高純度原料制備，減少實驗干擾因素，提升結果可靠性。組織細胞外囊泡細胞實驗

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外泌體研究常見問題解答35.CD9或CD81等是否對外泌體起源具有特異性？目前，對于一般的外泌體標記物還沒有達成共識。研究界目前的建議是結合檢測許多膜結合或膜相關蛋白，以驗證膜的存在。靶點CD63和CD81存在于許多不同的外泌體制劑中，CD9也是如此。然而，檢測到至少2種不同的細胞系釋放CD9陰性的外泌體（Jurkat細胞和幾種B細胞淋巴瘤細胞）。同樣重要的是，通過對已知在ER、高爾基體或細胞核等隔室中表達的標記物進行染色，來證明不存在污染性囊泡。同樣重要的是，用相同的標記物來表征宿主細胞。6.外泌體中是否包含DNA？一般認為外泌體中不包含DNA，或包含少量線粒體DNA。因為外泌體在胞質中形成與包裹貨物，而在胞質中存在少量降解的線粒體DNA。目前有一些研究發現，在外泌體的表面，稱之為“corona”，中文叫“冠“或”暈“，在外泌體分泌到細胞外后，會吸附微量的游離DNA。金線蓮sEVs源頭工廠

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